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1、 待检菌菌龄应为18-24小时。一般情况下，革兰氏阴性菌的染色反应较为稳定，不易受菌龄的长短影响；而革兰氏阳性菌，有的在幼龄时呈阳性，超过24小时可变为阴性。故培养物越陈旧，菌细胞衰老、死亡，则染色常为阴性，造成错判。
2、 涂片以匀薄为佳，切不可浓厚。过于密集的菌体，因洗脱不匀常呈假阳性。镜检革兰氏染色反应时，要以分散开的细菌着色为准。涂片后不宜用火焰烤干，宜自然干燥；若经火焰固定时，应以不烫手为度，以免菌体受损，致使染色反应不准。
3、 革兰染色操作的关键步骤是对脱色的掌握，脱色时间不足，革兰氏阴性菌可染成阳性菌；脱色过度，革兰阳性菌会染e79fa5e98193e4b893e5b19e332成阴性菌。故应注意掌握，以无紫色脱出时立即水洗。脱色时间按涂沫厚薄、涂片含水量多少适当掌握，涂沫厚、涂片含水少（水洗后沥干水分）时，脱色时间稍长；涂沫薄、涂片含水量多（未沥干）时，脱色时间稍短，在20-30秒内调整。
4、 碘液配制后，应装在密闭的暗色瓶内储存。如因储存不当，部分碘将被挥发或被还原，试液由原来的红棕色变为淡黄色，以至影响固定甲紫的作用，故不宜再用。
5、 革兰氏染色能否获得满意的结果，与操作者的经验有很大关系。操作没有把握或对染液有怀疑时，应以对照菌同时染色。
牙垢中细菌很多，各类菌型都有，引起龋齿的菌主要是革兰氏染色阴性的乳酸杆菌。
对青霉素有抗性就是抗Amp
1.设定不同浓度梯度的Amp，与你需要的培养基混合均匀，倒平板（Amp是不能高温高复压灭菌的，也不能用紫外灭菌，只能用过滤制除菌的哦，记住，如果不是就失效了）
2.将你要分离目的细菌的混合液取少量知，在上述平板上用涂布器涂布均匀，合适温度培养。
3.选取能长出少量单菌落的平板，记得那个平板的Amp浓度
4.用接种环挑取单菌落，在该Amp浓度的平板上画线分离，还要进行镜检，确定是一种还是多种这样的细菌。则可以道分离到你想要的细菌了。
注意：每个浓度的Amp平板要做多个平衡。
1、肯知定不是双歧杆菌和粪肠球菌，双歧杆菌呈弹弓分叉的形状，球菌就不用说了吧道
2、也不是蜡样芽孢杆菌，芽孢菌革兰氏染色，一般是紫色、菌体中空的
3、第一眼印象非常像乳酸杆菌，专乳酸杆菌一般染色结果为：紫色，长属杆菌、连成串
这个是嗜酸乳杆菌无疑了